半数抑制浓度

在这种类型的测定中，每个测定管中使用单一浓度的放射性配体（通常是激动剂）。配体以低浓度使用，通常等于或低于其K_d值。然後在存在一定濃度的其他競爭性非放射性化合物（通常是拮抗劑）的情況下測定放射性配體的特異性結合水平，以測量它們競爭結合放射性配體的效力。競爭曲線也可以通過計算機擬合到邏輯函數，如直接擬合中所述。

在这种情况下，IC₅₀是竞争配体的浓度，其取代放射性配体的50％的特异性结合。使用由Yung-Chi Cheng和William Prusoff制定的Cheng-Prusoff方程将IC₅₀值转换成绝对抑制常数K_i (参见K_i )。[4][5]

IC₅₀不是亲和力的直接指标，尽管至少对于竞争性激动剂和拮抗剂，两者可以通过Cheng-Prusoff 方程关联起来。[6]对于酶促反应，该方程为：

${\displaystyle K_{i}={\frac {{\ce {IC50}}}{1+{\frac {[S]}{K_{m}}}}}}$

其中 K_i是抑制剂的结合亲和力，IC₅₀是抑制剂的功能强度，[S] 是固定底物浓度，K_m是米氏常数，即酶活性达到最大一半时的底物浓度（但为经常与酶的底物亲和力相混淆，但事实并非如此）。

或者，对于细胞受体的抑制常数： [7]

${\displaystyle K_{i}={\frac {{\ce {IC50}}}{{\frac {[A]}{{\ce {EC50}}}}+1}}}$

其中[A]是激动剂的固定浓度，EC₅₀是导致受体最大激活一半的激动剂浓度。尽管化合物的IC₅₀值可能因实验条件（例如底物和酶浓度）而异，但K_i是绝对值。 K_i是药物的抑制常数；竞争测定中竞争配体的浓度，如果不存在配体，则竞争配体将占据受体的50%。[5]