原位杂交技术
原位杂交化学技术(英語:,缩写:ISH),简称原位杂交,是核酸杂交技术的一种方式。其使用标记的互补DNA,RNA或修饰的核酸链(即探针)定位组织的一部分或部分中的特定DNA或RNA序列(即原位)。如果组织足够小(例如植物种子,果蝇胚胎),也可以定位整个组织,细胞和循环肿瘤细胞。这与免疫组织化学不同,免疫组织化学通常是定位组织切片中的蛋白质。
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RNA原位杂交 - KRT5和管家基因在人黑色素瘤FFPE组织切片中明视野和荧光显微镜下的可视化图片
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使用ViewRNA FISH Assays在细胞中进行多重RNA可视化
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野生型果蝇胚胎在不同发育阶段的原位杂交(使用驼背基因的RNA)
原位杂交用于揭示特定核酸序列在染色体或组织中的位置,这是理解基因的组织,调节和功能的关键步骤。
目前使用的关键技术包括:用寡核苷酸和RNA探针(放射性标记和半抗原标记)与 mRNA 原位杂交;用光学和电子显微镜进行分析; 整体原位杂交;和荧光原位杂交检测染色体序列等。
基本原理
两条核苷酸单链片段在适宜的条件下,能形成 DNA-DNA 或 RNA-RNA 双链分子,用带有标记的 DNA 或 RNA 片段作为核酸探针,与组织或细胞内待测核酸(RNA) 片段进行杂交,然后通过放射自显影、荧光显微镜观察或酶促底物显色的方法予以显示,确定目的基因的 mRNA 的存在与定位情况。
参考文献
- O'Connor, Clare. . Nature Education. [2018-10-28]. (原始内容存档于2017-10-04).
- Gall, JG; Pardue, ML. . Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. June 1969, 63 (2): 378–83. PMC 223575
. PMID 4895535. doi:10.1073/pnas.63.2.378.
- Gall, Joe. . Lasker Foundation. [2018-10-28]. (原始内容存档于2015-10-04).
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