布拉德福蛋白質定量法

布拉德福蛋白質定量法（Bradford protein assay），亦稱作“考馬斯亮藍法”、“考馬斯藍染色法”（coomassie blue staining），為一種利用光譜學技術分析溶液中蛋白質濃度的技術。本定量法會受待測胺基酸序列影響，此方法為Marion M. Bradford醫生所開發。

原理
左：布拉德福溶液
右：布拉德福溶液+溶菌酶。

布拉德福蛋白質定量法為一種利用比色法測定蛋白質濃度的化驗法。考馬斯亮藍G-250在酸性環境下，會從紅色型態轉為藍色型態，並與蛋白質緊密結合。在形成這個複合物的過程中會經歷兩種反應：紅色態的考馬斯亮藍會先將其自由電子丟給蛋白質的可電離區，造成蛋白質構型改變，並暴露其疏水性區段。於是蛋白質的三級結構會以凡得瓦力與染劑結合。此外，染劑中的負電區會與蛋白質中的正電區相互結合，與蛋白質結合的考馬斯亮藍會因此穩定其藍色構型，造成溶液顏色改變，此時即可利用光譜儀來測量此變化。

与蛋白结合之后的染料，在一段时间（2 分钟到 1 小时）之内，其吸收光谱图在 595 nm 处有一个最大吸收峰。[1] 染料在与蛋白结合前，以阳离子形态存在，显红色或者绿色；与蛋白结合之后，染料分子的阴离子形态被稳定，显蓝色。染料的吸收光谱在 595 nm 处的吸收峰的增加，正比于结合了蛋白质的染料分子数目，故也正比于样品中蛋白质的数目（浓度）。

布拉德福蛋白質定量法与其它测量蛋白的方法不同，不容易受到蛋白质中其它化学成分的影响。

缺點

此蛋白质分析法会受几种洗涤剂和中性盐的干扰，如SDS，Triton。 结果也取决于所分析蛋白质中氨基酸的种类。

實驗方法

實驗器材

實驗步驟（標準分析，濃度：200-1500 µg/mL）


  1. 準備一純蛋白質（通常以牛血清蛋白）溶於0.15 M 氯化鈉溶液中，稀釋濃度為250、500、750和1500 µg/mL。並同時以同濃度稀釋待測蛋白質。
  2. 在每個試管加入 100 µL 的稀釋蛋白質
  3. 加入 5.0 mL 的考馬斯亮藍G-250到各試管並混合均勻。
  4. 將光譜儀波長調整至 595 nm，並以無蛋白質的一管作為基準。
  5. 5分鐘後測量各試管在 595 nm 下的吸光值
  6. 畫出標準曲線，計算其吸光係數，並推估蛋白濃度

替代化驗法

其他替代蛋白質化驗法還有：

參考文獻
  1. Bradford, M. Marion. . Analytical Biochemistry. 1976, 72 (1-2): 248-254 [2015-04-16]. PMID 942051. doi:10.1016/0003-2697(76)90527-3. （原始内容存档于2019-06-14）.
  • Zor, T.; Selinger, Z., , Anal. Biochem., 1996, 236: 302–308, PMID 8660509, doi:10.1006/abio.1996.0171
  • Noble, J.E.; Bailey, M.J.A., , Methods Enzymol., 2009, 463: 73–95, doi:10.1016/S0076-6879(09)63008-1
  • Albright, Brian, : 60, 2009, ISBN 978-0763765668
  • Stephenson, Frank Harold, : 252, 2003, ISBN 0126657513
  • Dennison, Clive, , Focus on structural biology, 2003, 3: 39, ISBN 1402012241
  • Ibanez, Jorge G., : 60, 2007, ISBN 0387260617

外部連結
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