酶谱法

酶谱法或酶谱（英语：Zymography）是一种基于酶的底物库来检测水解酶的凝胶电泳技术。使用三种类型的酶谱法；凝胶酶谱法、原位酶谱法和体内酶谱法中。[2]例如，嵌入聚丙烯酰胺凝胶中的明胶将被凝胶中运行的活性明胶酶消化。考马斯亮蓝染色后，退化区域在深色染色背景下显示为清晰的条带。[3]

诺氏疟原虫的天冬酰胺内肽酶印记.[1]

酶谱一词的现代用法已经被用来定义发酵产品的研究和编目，例如啤酒或葡萄酒，通常由特定的酿酒师或在确定的发酵类别中进行，例如使用特定的酵母菌株或细菌种类。酶谱也指相关的发酵产品的集合，被视为一个作品集。例如，特定啤酒厂生产的所有啤酒都可以统称为其酶谱。

另见酶学（又称酶谱应用科学）。酶学涉及发酵的生化过程，特别是酿造、酿酒和其他发酵食品中发酵酵母和细菌的选择。例如，啤酒酿造涉及应用顶部（淡啤酒）或底部发酵酵母（啤酒），以生产所需的各种啤酒。酵母的合成会影响啤酒的风味特征，即双乙酰（黄油、奶油糖果的味道或香气）。

凝胶酶谱法

用于SDS-PAGE的样品将在标准非还原加载缓冲液中制备。在这过程中不需要还原剂或将其煮沸，因为它们会干扰酶的重新折叠。在丙烯酰胺凝胶的制备过程中，将合适的底物（例如用于蛋白酶检测的明胶或酪蛋白）包埋在分离胶中。电泳后，通过在未缓冲的曲拉通X-100中孵育从而将凝胶（或酶谱）中的十二烷基硫酸钠去除，然后在适当的消化缓冲液中孵育，以便在37°C下的最佳时间长度孵育。随后对酶谱进行染色（通常使用氨基黑10B或考马斯亮蓝），消化区域显示为清晰的条带，而底物已被酶降解的则呈现深色染色背景。

标准协议的变体

标准方案可能需要根据样品酶进行修改；例如，黑腹果蝇消化糖苷酶通常在还原条件下（即存在2-巯基乙醇或二硫苏糖醇）以及在一定程度上加热条件下存活。事实上，加热到50°C后的分离往往会表现出条带分辨率的显着增加，而没有明显的活性损失。[4][5]

过去用于α-淀粉酶活性酶谱分析的常用方案也就是所谓的W.W.多恩淀粉膜方案。这里运行天然PAGE凝胶以分离匀浆中的蛋白质。随后，将其中溶解（或更准确地说，悬浮）淀粉的薄凝胶覆盖在原始凝胶上一段时间。[6]然后用卢戈氏碘液对淀粉染色。

凝胶酶谱通常用于检测和分析微生物产生的酶。[7]这导致了标准协议的变化，例如混合底物酶谱法。[8]

反向酶谱将底物和酶与丙烯酰胺共聚，可用于证明酶抑制剂的活性。染色后，抑制区域可视化为透明（或轻微染色）背景下的暗条带。

在印记技术中，酶通过非变性凝胶电泳分离，凝胶置于底物处理过的洋菜上。[9]

酶谱法也可应用于其他类型的酶，包括木聚糖酶、脂肪酶和几丁质酶。

参见

参考资料
  1. Hempelmann, E.; Putfarken, B.; Rangachari, K.; Wilson, R.J.M. . Parasitology. 1986, 92 (2): 305–312. PMID 3520446. doi:10.1017/S0031182000064076.
  2. Vandooren J, Geurts N, Martens E, Van den Steen PE, Opdenakker G. . Nat Methods. 2013, 10 (3): 211–220. PMID 23443633. S2CID 5314901. doi:10.1038/nmeth.2371.
  3. . www.abcam.com. [2017-05-12]. （原始内容存档于2023-02-22） （英语）.
  4. Martínez TF, Alarcón FJ, Díaz-López M, Moyano FJ. . Electrophoresis. 2000, 21 (14): 2940–2943. PMID 11001307. doi:10.1002/1522-2683(20000801)21:14<2940::AID-ELPS2940>3.0.CO;2-S.
  5. Snoek-van Beurden PA, Von den Hoff JW. . BioTechniques. 2005, 38 (1): 73–83. PMID 15679089. doi:10.2144/05381RV01 可免费查阅.
  6. Doane WW. . J Exp Zool. 1969, 171 (3): 31–41. PMID 5348624. doi:10.1002/jez.1401710308.
  7. Lantz MS, Ciborowski P. 需要免费注册. Methods Enzymol. Methods in Enzymology. 1994, 235: 563–594. ISBN 9780121821364. PMID 8057927. doi:10.1016/0076-6879(94)35171-6.
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